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      分享:針對液相色譜柱常見幾種問題的解決方案

      發布日期:2021-11-04      瀏覽次數:1754
             分享:針對液相色譜柱常見幾種問題的解決方案
        1.柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。
        1.1壓力過高:
        這是高效液相在使用中最常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,我們應該分段進行檢查。
        (1)首先斷開真空泵的入口處,此時,PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果,液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。
        處理方法:
        用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,再檢查;
        (2)打開Purge閥,使流動相不經過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。
        處理方法:
        將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下,過濾白頭正常,再檢查;
        (3)把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。
        處理方法:
        如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞,則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。
        假如,按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但是,一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以,盡量少用。
        1.2壓力過低
        壓力過低的現象一般是由于系統泄漏
        處理方法:
        尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當然,還有一個原因就是泵里進了空氣,但此時表現的往往是壓力不穩,忽高忽低,更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。
        處理方法:
        打開Purge閥,用3~5mL/min的流速沖洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
        2.漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。
        2.1基線漂移
        一般說來,機器剛起動時,基線容易漂移,大概要半個小時的平衡時間,如果,你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但是,如果你在實驗過程中發現基線漂移,則你要考慮下面的原因:
        ①紫外燈能量不足。
        解決方法:
        更換新的紫外燈;
        ②柱溫波動。
        解決方法:
        控制好柱子和流動相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
        ③流通池被污染或有氣體。
        解決方法:
        用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
        ④流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。
        解決方法:
        檢查流動相的組成,使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。
        ⑤樣品中有強保留的物質(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而,表現出一個逐步升高的基線。
        解決方法:
        使用保護柱,如有必要,在進樣之間。在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。
        ⑥檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
        解決方法:
        將波長調整至最大吸收波長處;
        ⑦流動相的pH值沒有調節好。
        解決方法:
        加適量的酸或堿調至最佳pH值;
        2.2保留時間漂移
        保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s,超過了半分鐘可看做保留時間漂移,就無法進行定性,你要考慮以下原因:
        ①溫控不當。
        解決方法:
        調好柱溫,檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
        ②流動相比例變化。
        解決方法:
        檢查四元泵的比例閥是否有故障。
        ③色譜柱沒有平衡。
        解決方法:
        在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。
        ④流速變化。
        解決方法:
        重新設定流速。
        ⑤泵中有氣泡。
        解決方法:
        從泵中除去氣泡。
        2.3峰型異常問題
        峰型問題是液相的主要問題,在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型,對于各種各樣的異常峰,要區別對待,從主要問題出發,一個一個加以解決。
        ①所有峰均為寬峰。
        解決方法:
        系統未達到平衡;
        溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;
        色譜柱尺寸及類型選擇不正確;
        色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;
        溫度變化造成的影響。
        ②所出峰比預想的小。
        解決方法:
        樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確,定量環體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現問題。
        ③色譜圖中未出峰。
        解決方法:
        系統未進樣或樣品分解;
        泵未輸液或流動相使用不正確;
        檢測器設置不正確;
        針對以上情況成因作相應調整即可。。。
        ④一個峰或幾個峰是負峰。
        解決方法:
        流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
        ⑤所有峰均為負峰。
        解決方法:
        信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;
        光學裝置尚未達到平衡。
        ⑥出現雙峰或肩峰。
        解決方法:
        進樣量過大;樣品濃度過高;
        保護柱或色譜柱柱頭堵塞;
        保護拄或色譜柱污染或失效;
        柱塌陷或形成短通道。
        ⑦前伸峰。
        解決方法:
        進樣量或樣品濃度高;
        溶解樣品的溶劑較流動。
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